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二氧化碳培養(yǎng)箱正確使用方法及日常維護保養(yǎng)
二氧化碳培養(yǎng)箱為細(xì)胞生長提供了理想的生長環(huán)境,細(xì)胞在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)數(shù)月甚至數(shù)年,如果培養(yǎng)不當(dāng)導(dǎo)致細(xì)胞死亡可能造成極大的科研成果損失。培養(yǎng)箱本身性能的穩(wěn)定和可靠性固然重要,另外,正確的使用方法和日常保養(yǎng)對實驗結(jié)果也是至關(guān)重要。
今天為大家介紹減少實驗室細(xì)胞污染的三種途徑:
1.正確的使用培訓(xùn);
2.持續(xù)的日常保養(yǎng);
3.適當(dāng)?shù)臄[放位置。
正確的使用培訓(xùn)
實驗室內(nèi)往往眾多實驗人員共用一臺培養(yǎng)箱,難免有人為操作失誤,都會增大交叉污染的風(fēng)險,因此應(yīng)對所有實驗人員進(jìn)行培養(yǎng)箱的使用培訓(xùn)。需要注意以下幾點:
設(shè)備使用培訓(xùn)
使用培養(yǎng)箱前必須著個人防護裝備,按照實驗室生物安全等級要求實施實驗室管理規(guī)范、無菌操作方法、標(biāo)準(zhǔn)操作流程(SOP)。
實驗服袖口需扎進(jìn)手套內(nèi)(如圖A),未扎進(jìn)的袖口可能接觸到潔凈的培養(yǎng)基,會增加交叉污染的風(fēng)險(如圖B),另外裸露皮膚上的可能潛在的污染源也會增加交叉污染的風(fēng)險(如圖C);
手套使用前用70%常用消毒劑消毒;
培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)盤、培養(yǎng)皿等在放入培養(yǎng)箱前需做好標(biāo)記;
從箱子后部依次往前擺放培養(yǎng)基,以免最早放置的被過多干擾。
近期需要取出的材料放至靠近箱門處并做好標(biāo)記;
帶蓋的長頸瓶應(yīng)遠(yuǎn)離箱門以避免交叉污染;
避免堆疊太多培養(yǎng)基;
避免干擾細(xì)胞生長盡量少開箱門。
人員操作培訓(xùn)
建立完善的實驗室管理規(guī)范;
新進(jìn)實驗員應(yīng)建立培訓(xùn)流程;
實驗室內(nèi)應(yīng)定期或不間斷進(jìn)行操作培訓(xùn);
做好詳盡的文件記錄,文件記錄不僅單純的記錄實驗室事件,對設(shè)備定期維護、實驗數(shù)據(jù)查找都能起到很好的提示和記錄,比如提示每周檢查過濾器、記錄開門頻率對細(xì)胞生長的影響。
持續(xù)的日常維護保養(yǎng)
培養(yǎng)箱日常維護保養(yǎng)對其性能的保障非常重要,甚至比操作技術(shù)失誤對實驗結(jié)果的影響更大。做好培養(yǎng)箱的日常維護不僅減少對實驗結(jié)果的影響更能延長培養(yǎng)箱的使用壽命,降低實驗室成本。
完善的文件管理
廠商提供的操作維護說明書是很好的參考文件,會列舉日常使用及保養(yǎng)需注意的要點,可以作為實驗室培養(yǎng)箱維護文件的參考。制定維護保養(yǎng)文件時需全面考慮培養(yǎng)箱使用頻率、實驗室環(huán)境潔凈度、使用人員的數(shù)量、以及培養(yǎng)細(xì)胞的類型等,綜合各方面情況列出合理的方案。
箱體的定期清潔
培養(yǎng)箱內(nèi)外部的定期清潔頻率取決于培養(yǎng)細(xì)胞的類型和實驗室環(huán)境。
外部清潔必須定期去除灰塵及長期附著在表面的污染物,這些污染物在開門時很可能隨空氣流動潛入箱體內(nèi)。培養(yǎng)量大的實驗室建議每周清潔一次,培養(yǎng)量小的實驗室建議每月清潔一次。使用較溫和的家用清潔劑或蒸餾水清潔即可。
不銹鋼內(nèi)膽建議每月清潔一到兩次,圓角的設(shè)計(圖D)可以減少污染物的產(chǎn)生,可使用70%異丙醇、酒精或其它無腐蝕性的消毒劑擦拭,切記不可使用鹵素類消毒劑(次氯酸、漂白粉)。門口墊圈處(圖E)很易滋生污染物,需注意加強清潔,或拆下進(jìn)行高溫滅菌。
水盤的清潔
水盤的清潔和換水是培養(yǎng)箱日常維護很重要的項目,至少一周需清潔一次,頻繁加水以保障飽和濕度。水盤加水使用蒸餾水或去離子水,可以加少劑量的硫酸銅溶液抑制污染物。
防止干燥
如果培養(yǎng)環(huán)境濕度不足,培養(yǎng)基中的水分會蒸發(fā)造成環(huán)境干燥影響細(xì)胞生長。至少每周加一次水對保持培養(yǎng)箱濕度非常重要。
污染風(fēng)險降低
細(xì)菌、霉菌、病毒或支原體污染是細(xì)胞生長最大的威脅?,F(xiàn)代的培養(yǎng)箱的設(shè)計和特點可以適當(dāng)減少污染發(fā)生。
HEPA過濾器
閉環(huán)HEPA過濾器是減少污染發(fā)生的一個重要設(shè)計。HEPA過濾器持續(xù)提供箱內(nèi)潔凈的空氣。但為保證HEPA過濾的有效性,HEPA需要定期更換,每周或每兩周應(yīng)定期檢查過濾器。進(jìn)氣過濾器(圖F)的壽命一般在3-6個月。NuAire建議供氣過濾器(圖G)每使用5瓶氣或已變黃時更換一次,大的囊性過濾器(圖H)每兩年需更換一次。
配備HEPA過濾器的培養(yǎng)箱類似一個微型潔凈間,箱內(nèi)持續(xù)過濾的空氣使箱體空氣潔凈度達(dá)到百級。每一次開箱門都可能造成污染物的侵襲,NuAire培養(yǎng)箱每20分鐘換氣一次,使污染物快速被過濾,箱體內(nèi)空氣潔凈度達(dá)ISO 5級。
循環(huán)滅菌
一些實驗室潛在病原微生物如HIV病毒,需要145℃干熱循環(huán)滅菌才能有效滅殺。145℃滅菌程序需要持續(xù)8-14小時,可選擇在夜間運行。NuAire培養(yǎng)箱的層架和內(nèi)部五金件耐受145℃滅菌,無需滅菌前取出,節(jié)約了滅菌時間。
145℃滅菌需要按照實驗室SOP根據(jù)實際需要運行,并且不能代替日常的清潔保養(yǎng)。
放置適當(dāng)位置
培養(yǎng)箱需要放置在實驗室內(nèi)合適的位置:需遠(yuǎn)離走廊,環(huán)境溫度需穩(wěn)定,遠(yuǎn)離水源,遠(yuǎn)離通氣設(shè)備以免空氣污染,遠(yuǎn)離窗口避免陽光直射,遠(yuǎn)離其它熱源如高壓蒸汽滅菌器,以及離電源近的位置。