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多重熒光標記101:基本術語表
揭秘精密系統(tǒng)
生物組織是多類細胞中數(shù)千種蛋白質(zhì)相互作用的結(jié)果,這些蛋白質(zhì)共同保障組織運行正常。多標免疫熒光成像是一種新型技術,能清晰地可視化、識別、量化多種生物標志物及其在微環(huán)境中的分布情況,以便用戶獲取更清晰的目標組織圖像(包括多類細胞及其環(huán)境)。
為便于您了解多標組織成像,我們整理了一些術語供您參考。
圖1:胰腺癌的多標組織成像分析整體解決方案顯示六輪四種生物標志物。右側(cè)為最終的多標組織成像,共顯示了24個生物標志物。
圖2:用Cell DIVE成像的胰腺癌組織切片,顯示4種生物標志物:SMAC、PCAD、ATP101和LDHA。
自發(fā)熒光
生物樣本自然發(fā)射的光。自發(fā)熒光會干擾生物標志物成像,將其去除可以提高生物標志物的信噪(自發(fā)熒光)比。去除自發(fā)熒光后,分析時只需考慮真正的陽性生物標志物即可。
生物標志物
一種用于指示生物來源、特定器官的存在情況,或生理條件或過程;尤其可作為評判醫(yī)療狀況(易感性)的診斷指標。
染料偶聯(lián)抗體
附著有熒光分子的多克隆或單克隆抗體,可用于可視化組織。
圖3:30種生物標志物的表達模型。(左)生物標志物的細胞圈選。(右)30種生物標志物的Cell DIVE圖像。
福爾馬林固定的
石蠟包埋(FFPE)組織切片
FFPE是一種保存和制備活檢標本的方式。將組織樣本固定在甲醛中,以保存好組織內(nèi)的蛋白質(zhì)與結(jié)構(gòu)。固定后,將組織嵌入石蠟,以便對組織切片并將其放上玻片。
免疫熒光(IF)
一種依靠抗體與其抗原相互作用的染色技術。附著熒光標記物(熒光基團)的染料偶聯(lián)抗體與其在細胞內(nèi)的特異性生物分子靶點相結(jié)合,以可視化靶分子及其在樣本中的分布情況。
直接免疫熒光——使用可直接結(jié)合特定靶點的單一抗體。熒光基團專門與抗體偶聯(lián)。
間接免疫熒光——使用兩種抗體。一抗與特定靶點結(jié)合。然后,熒光基團偶聯(lián)的二抗與一抗結(jié)合,可用于檢測。
超多標免疫熒光成像
一種免疫熒光技術,用于可視化組織微環(huán)境中多種抗原的分布情況。使用熒光基團標記的抗體探測FFPE組織切片,然后成像,即可去除熒光信號。接下來,再用另外的抗體重新探測組織。單個圖像被分層,生成組織的完整圖像和所有已探測抗原的定位。
多標表型譜
每種細胞類型均表達有利于其功能的特定蛋白質(zhì)。這些單獨的生物標志物全部可視化后,有助于鑒定組織微環(huán)境中的細胞,從而構(gòu)建整個組織表型的完整圖像。
單細胞分析
在單細胞層上研究特定生物分子的存在和定位情況。單細胞分析可用于研究群體內(nèi)的細胞間變異情況(如器官或組織內(nèi))。
空間細胞生物學/
空間生物標志物分析
研究組織環(huán)境中的細胞??臻g細胞生物學和生物標志物分析可用于繪制組織內(nèi)細胞及其與周圍細胞的相互作用的圖像。
組織/腫瘤微環(huán)境
組織結(jié)構(gòu)中各種細胞類型有組織的組合,通過物理、機械和生化機制影響細胞表型。全面了解腫瘤微環(huán)境有利于評估癌癥進展情況,找出治療癌癥的新療法。
寬場顯微鏡
常用于多標顯微鏡技術,可將整個目標標本暴露在光源之下,從而對整個視場進行成像。在多標寬場顯微鏡中,建議使用薄標本(單個細胞的厚度)進行細胞表型分析。
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