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全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)簡(jiǎn)介
點(diǎn)擊次數(shù):6734 更新時(shí)間:2021-05-31
全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)簡(jiǎn)介
全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)(Automated patch clamp technique)的出現(xiàn)標(biāo)志著膜片鉗技術(shù)已經(jīng)發(fā)展到了一個(gè)嶄新階段,從這個(gè)意義上說(shuō),前面所講的膜片鉗技術(shù)我們稱之為傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)(Traditional patch clamp technique)。離子通道是藥物作用的重要靶點(diǎn),膜片鉗技術(shù)被稱為研究離子通道的“金標(biāo)準(zhǔn)”。美國(guó)食品及藥物管理局(FDA)規(guī)定,非心臟類新藥必須有其對(duì)心臟hERG鉀通道是否抑制的膜片鉗研究結(jié)果,否則新藥不得用于臨床。
傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)每次只能記錄一個(gè)細(xì)胞(或一對(duì)細(xì)胞),對(duì)實(shí)驗(yàn)人員來(lái)說(shuō)是一項(xiàng)耗時(shí)耗力的工作,它不適合在藥物開(kāi)發(fā)初期和中期進(jìn)行大量化合物的篩選,也不適合需要記錄大量細(xì)胞的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究。全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)的出現(xiàn)在很大程度上解決了這些問(wèn)題,它不僅通量高,一次能記錄幾個(gè)甚至幾十個(gè)細(xì)胞,而且從找細(xì)胞、形成封接、破膜等整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化,免除了這些操作的復(fù)雜與困難。這兩個(gè)優(yōu)點(diǎn)使得膜片鉗技術(shù)的工作效率大大提高了!
不同的全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)所采用的原理也不*相同,大體上有如下幾種:
1. Flip-Tip翻轉(zhuǎn)技術(shù):將一定密度的細(xì)胞懸液灌注在玻璃電極中,下降到電極的單個(gè)細(xì)胞通過(guò)在電極外施加負(fù)壓可以與玻璃電極形成穩(wěn)定的高阻封接,打破露在玻璃電極開(kāi)口外的細(xì)胞膜就形成了全細(xì)胞記錄模式。德國(guó)Flyion公司的Flyscreen 8500系統(tǒng)采用的就是這一技術(shù),其通量zui高為6,即一次可同時(shí)記錄6個(gè)細(xì)胞。它的顯著特點(diǎn)是:(1)仍然采用玻璃毛坯作為電極;(2)藥物施加微量、快速。
2. SealChip技術(shù):*摒棄了玻璃電極,而是采用SealChip平面電極芯片,一定密度的細(xì)胞懸液灌注在芯片上面,隨機(jī)下降到芯片上約1-2μm的孔上并在自動(dòng)負(fù)壓的吸引下形成高阻封接,打破孔下面的細(xì)胞膜形成全細(xì)胞記錄模式。采用這一技術(shù)的美國(guó)Axon(MDS)公司的PatchXpress 7000A系統(tǒng)是高通量全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)的*,是離子通道藥物研發(fā)的革命性工具,在國(guó)外實(shí)驗(yàn)室和制藥廠廣泛用于hERG通道藥理學(xué)的研究。其通量zui高為16,即一次可同時(shí)記錄16個(gè)細(xì)胞。同時(shí),其藥物施加微量、快速,不僅用于藥物篩選,還大量用于離子通道的基礎(chǔ)研究。
3. Population Patch Clamp技術(shù):同SealChip技術(shù)一樣,*摒棄了玻璃電極,而是采用PatchPlate平面電極芯片。該芯片含有多個(gè)小室,每個(gè)小室中含有很多1-2μm的封接孔。在記錄時(shí),每個(gè)小室中封接成功的細(xì)胞數(shù)目較多,獲得的記錄是這些細(xì)胞通道電流的平均值。因此,不同小室其通道電流的一致性非常好,變異系數(shù)很小。美國(guó)Axon(MDS)公司采用這一技術(shù)研發(fā)出了全自動(dòng)高通量的IonWorks Quattro系統(tǒng),成為藥物初期篩選的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
此外,同SealChip技術(shù)一樣采用平面電極芯片,但只含有一個(gè)封接孔的小型全自動(dòng)膜片鉗設(shè)備也已經(jīng)問(wèn)世。這種小型設(shè)備代替了顯微鏡、防震臺(tái)/屏蔽網(wǎng)和微操縱器,一次只記錄一個(gè)細(xì)胞。雖然通量不高,但是由于封接破、膜等過(guò)程為自動(dòng)化,工作效率也有顯著提高。德國(guó)Nanion公司的Port-a-Patch就是這樣的全自動(dòng)膜片鉗設(shè)備。
全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)采用的標(biāo)本必須是懸浮細(xì)胞,像腦片這類標(biāo)本無(wú)法采用。此外,全自動(dòng)膜片鉗技術(shù)只能進(jìn)行全細(xì)胞記錄模式、穿孔膜片鉗記錄模式以及細(xì)胞貼附式單通道記錄模式,而不能進(jìn)行其他模式的記錄。
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